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    ***代测序技术1975年由FrederickSanger所提出的链终止法以及1977年由WalterGibert所发明的链降解法被称为***代测序技术。1977年，WalterGilbert和FrederickSanger发明了***台测序仪，并应用其测定了***个基因组序列，噬菌体X174，全长5375个碱基。WalterGilbert和FrederickSanger也因在测序技术中的贡献获得了1980年诺贝尔化学奖。技术原理目前，基于***代测序技术的测序仪几乎都是采用Sanger提出的链终止法。链终止法测序的**原理是ddNTP的2'和3'端都不含羟基，因此在合成核酸链的过程中无法形成磷酸二酯键，从而导致DNA合成反应中断。在测定待测核酸片段的序列时，向反应体系中加入一定比例的带有放射性同位素标记的4种ddNTP，利用DNA聚合酶来延伸结合在待测核酸模板上的引物，河南专注迈杰转化医学NGS平台诚信合作，直到掺入一种链终止核苷酸为止，**终会得到一组长度各相差一个碱基的链终止产物，河南专注迈杰转化医学NGS平台诚信合作，这些产物可通过高分辨率变性凝胶电泳分离并根据其长度排序，凝胶处理后可用X-光胶片放射自显影进行检测，从而确定目的核酸片段各个位置的碱基，河南专注迈杰转化医学NGS平台诚信合作。完整的测序过程分为4步：：如要利用Sanger测序方法进行完整基因组的测定，首先要将提取得到的样品完整DNA打碎，形成DN**段，如只是测定单个目的基因的序列。 迈杰转化医学围绕生物标志物研究、伴随诊断开发，建立了完善的核酸组学、蛋白组学、细胞组学技术平台。河南专注迈杰转化医学NGS平台诚信合作

panFGFxpanel的优势在于：针对性强——panel“小而精”，集中研究FGFR及上下游信号通路关键基因；应用性广——panel小，成本低；搭配酶切建库法、快速杂交法，缩短TAT；灵活性强——探针可实现物理上模块区分，随时满足伴随诊断产品开发需求。➤➤方案3：IHC法检测FGF-19过表达当前针对肝*及乳腺*的FGFR4抑制剂开发速度很快，多个药物进入临床II期的研究。FGFR4-FGF19信号通路在肝细胞*（HCC）的发***展过程中发挥重要的作用。有研究显示，在骨骼肌中过表达FGF19的转基因小鼠在其生命早期会发生多发性HCC，而其他组织则不会受到影响，初步推断FGF19通过***FGFR4增加肝细胞增殖而诱导肝*（图6）。

图6高表达FGF19-FGFR4靶向晚期肝*[10]FGFR4高选择性抑制剂在FGF-19过表达的HCC荷瘤小鼠病理模型上呈现了***的抗**药效。FGF-19扩增和过表达有望成为FGFR4选择性抑制剂***HCC的重要生物标志物。迈杰转化医学的病理平台已经建立并系统验证了FGF-19IHC检测方法，迄今已为国内众多创新药企的临床研究提供了检测支持服务（图7）。 河北专注迈杰转化医学NGS平台推荐咨询迈杰转化医学病理检测平台配备有Roche/Leica/Dako等多种全自动检测仪器，有病理医生进行精确的判读。

02FGFR通路的异常调控FGF/FGFR通路的异常调控由多种因素介导，包括：基因改变（扩增、突变和染色体易位）；自分泌和旁分泌信号；血管生成以及上皮间质转化（EMT），进而促进细胞增殖、上皮间质转化和血管生成，并推动**的发***展、侵袭、转移等（图2），其中主要的三种调控途径为：a.FGFR基因扩增导致的蛋白过表达；b.***性突变,该突变通常会导致配体亲和力的提高或受体二聚化的增加及活化（配体不存在的情况下），或激酶结构域的组成性***；c.由染色体易位导致的基因融合。图2FGFR异常调控的致*机制[5]图2FGFR异常调控的致*机制[5]03FGFR异常形式以及在不同**中的分布FGFR常见变异形式包括基因扩增/过表达、***突变、基因融合等，此外还有重排、激酶结构域重复及自分泌***等。FGFR的异常表达已在多种实体瘤肿中检测到，如过表达常发生在肺*、脑*、头颈*、**腺*等，融合常发生在骨髓增生综合征、T细胞淋巴瘤、膀胱*和肝内胆管*等（表1）。

    包括67个y-str基因座和1个性别决定基因座amelogenin)。相比于illumina公司的forenseqtmdnasignatureprepkit，本发明提供的试剂盒中包含41个新的y-str基因座，能提供更多新的遗传信息。而且本发明提供的复合扩增体系中所有y-str基因座的**大扩增子长度都小于300bp，而forenseqtmdnasignatureprepkit中有约％(7/24)基因座的**大扩增子长度大于300bp，不利于降解检材的分析。本发明提供的试剂盒是本发明的发明人经过大量实验摸索获得的，试剂盒中的引物具有不可替换性；即引物被替换后，部分基因座将会被抑制且抑制效果不可预知。实验证明，采用本发明提供的试剂盒检测标准品2800m中68个基因座的str分型，分型结果准确。本发明具有重要的应用价值。附图说明图1为67个y-str基因座的pcr扩增产物的长度范围分布。具体实施方式以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。标准品2800m为promega公司的产品，产品目录号为dd7251。 【迈杰转化医学】一直以来致力于转化医学服务和伴随诊断产品开发及商业化。

    P7的序列：5’-CAAGCAGAAGACGGCATACGAG3’。PCR总体系为：2倍PCRMix15uL，10umol/LP71uL，1umol/LOP1uL或OP2uL，DNA5uL，NFW5uL。上述技术方案中，作为推荐，所述步骤4中的PCR总体系10uL具体为：VAHTSSYBRqPCRMasterMix5uL，qPCRPrimerMix1uL，DNA2uL，ROXReferenceDye2，NFW5uL。上述技术方案中，作为推荐，所述的***轮PCR扩增循环数目为10-14。上述技术方案中，作为推荐，所述的*二轮PCR扩增循环数目为10-14。本发明的优点和有益效果在于：提供一种基于多重PCR的二代测序建库技术。在二代测序过程中采用该技术则不需要再购买商业的建库试剂盒，所有反应试剂都可以单独购买组合，较大的降低了实验成本。另外由于在PCR过程中固定了一端的通用引物，较大的降低了多重PCR反应体系中的引物种类和数量，可以有效的抑制非特异性扩增和引物之间的相互干扰，也降低了不同引物间的扩增效率的差异。附图说明为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图**是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。迈杰转化医学可以提供覆盖肺ai、肠ai、肝ai、胃ai、乳腺ai、**腺ai等多种实体瘤的上百项检测项目。河南个性化迈杰转化医学NGS平台共同合作

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    h1)str分型；(h2)y-str分型；(h3)个体识别；(h4)亲权鉴定；(h5)种族推断。本发明还保护上述任一所述引物组合或上述任一所述复合扩增体系的应用，可为(h1)-(h5)中的至少一种：(h1)str分型；(h2)y-str分型；(h3)个体识别；(h4)亲权鉴定；(h5)种族推断。上述任一所述68个基因座具体可由amelogenin、dys19、dys385a/b、dyf387s1a/b、dys388、dys389-i、dys389-ii、dys390、dys391、dys392、dys393、dyf399s1、dyf404s1a/b、dys437、dys438、dys439、dys443、dys444、dys446、dys447、dys448、dys449、dys456、dys458、dys459a/b、dys460、dys481、dys485、dys504、dys505、dys508、dys510、dys518、dys520、dys522、dys527a/b、dys531、dys533、dys549、dys552、dys557、dys570、dys576、dys587、dys593、dys596、dys612、dys617、dys622、dys626、dys627、dys630、dys635、dys641、dys643、dys644、dys645、dys710、dys720、y-gata-a10和y-gata-h4组成。其中，amelogenin为性别决定基因座。dyf399s1包含三个分型片段。dys385a/b、dyf387s1a/b、dyf404s1a/b、dys459a/b和dys527a/b均包含两个分型片段。本发明提供的试剂盒可以检测68个基因座。 河南专注迈杰转化医学NGS平台诚信合作